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Lab 17 : Sérologie, Tests sérologiques directs et indirects - Biologie

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DISCUSSION

A. INTRODUCTION AU TEST SEROLOGIQUE

Les réponses immunitaires adaptatives font référence à la capacité du corps (soi) à reconnaître des antigènes étrangers spécifiques (non-soi) qui menacent son intégrité biologique. Il existe deux branches principales des réponses immunitaires adaptatives :

1. immunité humorale: l'immunité humorale implique la production de molécules d'anticorps en réponse à un antigène et est médiée par les lymphocytes B.

2. immunité à médiation cellulaire: L'immunité à médiation cellulaire implique la production de lymphocytes T cytotoxiques, de macrophages activés, de cellules NK activées et de cytokines en réponse à un antigène et est médiée par les lymphocytes T.

Pour comprendre les réponses immunitaires, nous devons d'abord comprendre ce que l'on entend par le terme antigène. Techniquement, un antigène est défini comme une substance qui réagit avec les molécules d'anticorps et les récepteurs d'antigène sur les lymphocytes. Un immunogène est un antigène qui est reconnu par le corps comme non-soi et qui stimule une réponse immunitaire adaptative. Pour simplifier, les antigènes et les immunogènes sont généralement appelés antigènes.

Chimiquement, les antigènes ont un poids moléculaire élevé protéines (y compris les protéines conjuguées telles que les glycoprotéines, les lipoprotéines et les nucléoprotéines) et polysaccharides (y compris les lipopolysaccharides). Ces antigènes protéiques et polysaccharidiques se trouvent à la surface des virus et des cellules, y compris les cellules microbiennes (bactéries, champignons, protozoaires) et les cellules humaines.

Comme mentionné ci-dessus, les lymphocytes B et les lymphocytes T sont les cellules qui réalisent des réponses immunitaires adaptatives. Le corps reconnaît un antigène comme étranger lorsque cet antigène se lie à la surface des lymphocytes B et des lymphocytes T au moyen de récepteurs spécifiques à l'antigène ayant une forme qui correspond à celle de l'antigène, semblable aux pièces imbriquées d'un puzzle. Les récepteurs antigéniques à la surface des lymphocytes B sont des molécules d'anticorps appelées récepteurs des lymphocytes B ou sIg ; les récepteurs à la surface des lymphocytes T sont appelés récepteurs des lymphocytes T (TCR).

Les les portions ou fragments réels d'un antigène qui réagissent avec les récepteurs des lymphocytes B et des lymphocytes T, ainsi qu'avec des molécules d'anticorps libres, sont appelés épitopes. La taille d'un épitope est généralement considérée comme équivalente à 5-15 acides aminés ou 3-4 résidus de sucre. Certains antigènes, tels que les polysaccharides, ont généralement de nombreux épitopes, mais tous ont la même spécificité. En effet, les polysaccharides peuvent être composés de centaines de sucres avec des chaînes latérales de sucre ramifiées, mais ne contiennent généralement qu'un ou deux sucres différents. En conséquence, la plupart des "formes" le long du polysaccharide sont les mêmes (voir Fig. 1). D'autres antigènes tels que les protéines ont généralement de nombreux épitopes de spécificités différentes. En effet, les protéines comptent généralement des centaines d'acides aminés et sont composées de 20 acides aminés différents. Certains acides aminés sont capables d'interagir avec d'autres acides aminés dans la chaîne protéique, ce qui fait que la protéine se replie sur elle-même et prend une forme tridimensionnelle complexe. En conséquence, il existe de nombreuses "formes" différentes sur la protéine (voir Fig. 2). C'est pourquoi les protéines sont plus immunogènes que les polysaccharides ; ils sont chimiquement plus complexes.

Un microbe, comme une seule bactérie, a de nombreuses protéines différentes (et polysaccharides) à sa surface qui forment collectivement ses différentes structures, et chaque protéine différente peut avoir de nombreux épitopes différents. Par conséquent, les réponses immunitaires sont dirigées contre de nombreuses parties ou épitopes différents du même microbe.

Animation flash d'épitopes réagissant avec des sIg spécifiques
les lymphocytes B.

version html5 de l'animation pour iPad montrant des épitopes réagissant avec un récepteur spécifique des cellules B sur un lymphocyte B.

Au niveau des maladies infectieuses, les éléments suivants peuvent agir comme des antigènes :

1.Mstructures microbiennes (parois cellulaires, capsules, flagelles, pili, capsides virales, glycoprotéines associées à l'enveloppe, etc.) ; et

2. Toxines microbiennes

Certain matières non infectieuses peuvent également agir comme des antigènes s'ils sont reconnus comme « non-soi » par l'organisme. Ceux-ci inclus:

1. Allergènes (poussière, pollen, cheveux, aliments, squames, venin d'abeille, médicaments et autres agents provoquant des réactions allergiques);

2. Tissus et cellules étrangers (à partir de greffes et de transfusions); et

3. Les propres cellules du corps que le corps ne reconnaît pas comme « moi normal » (cellules cancéreuses, cellules infectées, cellules impliquées dans les maladies auto-immunes).

Anticorps ou immunoglobulines sont des configurations protéiques spécifiques produites par les lymphocytes B et les plasmocytes en réponse à un antigène spécifique et capable de réagir avec cet antigène. Les anticorps sont produits dans le tissu lymphoïde et une fois produites, se trouvent principalement dans le plasma partie du sang (la fraction liquide du sang avant la coagulation). Sérum est la fraction liquide du sang après la coagulation.

Il existe 5 classes d'anticorps humains : IgG, IgM, IgA, IgD et IgE. Les anticorps les plus simples, tels que les IgG, IgD et IgE, sont des macromolécules en forme de « Y » appelées monomères composées de quatre chaînes de glycoprotéines. Il y a deux identiques chaînes lourdes ayant un poids moléculaire élevé qui varie avec la classe d'anticorps. De plus, il existe deux identiques chaînes légères d'une des deux variétés : kappa ou gamma. Les chaînes légères ont un poids moléculaire inférieur. Les quatre chaînes glycoprotéiques sont reliées les unes aux autres par des liaisons disulfure (S-S) et des liaisons non covalentes (voir figure 3A). Des liaisons S-S supplémentaires replient les chaînes de glycoprotéines individuelles en un certain nombre de domaines globulaires distincts. La zone où le haut du « Y » rejoint le bas s'appelle la charnière. Cette zone est flexible pour permettre à l'anticorps de se lier à des paires d'épitopes à différentes distances les uns des autres sur un antigène.

Les deux pointes du monomère "Y" sont appelées les Des portions fabuleuses de l'anticorps (voir Fig. 3A). Les 110 premiers acides aminés ou le premier domaine des chaînes lourde et légère de la région Fab de l'anticorps fournir une spécificité pour la liaison d'un épitope sur un antigène. Les portions fabuleuses fournir une spécificité pour la liaison d'un épitope sur un antigène. La partie inférieure du "Y" s'appelle le Partie Fc et cette partie est responsable de la activité biologique de l'anticorps (voir schéma des IgG ; Fig. Selon la classe d'anticorps, les activités biologiques de la partie Fc des anticorps incluent la capacité d'activer la voie du complément (IgG et IgM), de se lier aux phagocytes (IgG, IgA) ou se lient aux mastocytes et aux basophiles (IgE).

Deux classes d'anticorps sont plus complexes. L'IgM est un pentamère (voir figure 3B), constitué de 5 molécules de type "Y" connectées au niveau de leurs portions Fc, et l'IgA sécrétoire est un dimère constitué de 2 molécules de type "Y" (voir figure 3C).

Pour plus d'informations sur les antigènes, les anticorps et la production d'anticorps, consultez les objets d'apprentissage suivants dans votre guide de cours :

  • Antigènes ; Unité 6, Section IA2
  • Structure d'anticorps ; Unité 6 Section IIA2

Sérologie fait référence à l'utilisation de réactions antigène-anticorps en laboratoire pour à des fins de diagnostic. Son nom vient du fait que sérum, la partie liquide du sang où se trouvent les anticorps est utilisé dans les tests. Tests sérologiques peut être utilisé en laboratoire clinique de deux manières distinctes :

une. Pour identifier des antigènes inconnus (comme les micro-organismes). C'est appelé test sérologique direct. Tests sérologiques directs utilise une préparation connue d'anticorps, appelée antisérum, d'identifier un antigène inconnu tel qu'un micro-organisme.

b. Pour détecter les anticorps fabriqués contre un antigène spécifique dans le sérum du patient. C'est appelé test sérologique indirect. Tests sérologiques indirects est la procédure par laquelle anticorps dans le sérum d'une personne fabriqués par cet individu contre un antigène associé à une maladie particulière sont détectés à l'aide d'un antigène connu.

UNEles réactions antigène-anticorps peuvent être détectées en laboratoire par diverses techniques. Certaines des techniques couramment utilisées pour observer les réactions antigène-anticorps in vitro sont brièvement décrites ci-dessous.

une. Agglutination

L'antisérum connu provoque l'agrégation ou l'agglutinement des bactéries ou d'autres antigènes particulaires. Les antigènes de taille moléculaire peuvent être détectés en fixant les anticorps connus à des particules insolubles plus grosses telles que des particules de latex ou des globules rouges afin de rendre l'agglutination visible à l'œil nu.

b. Précipitation

L'antisérum connu est mélangé à l'antigène test soluble et un précipité trouble se forme dans la zone de proportion optimale antigène-anticorps.

c. Complément-fixation

L'antisérum connu est mélangé avec l'antigène d'essai et le complément est ajouté. Des globules rouges de mouton et des hémolysines (anticorps qui lysent les globules rouges de mouton en présence de complément libre) sont ensuite ajoutés. Si le complément est lié à la première réaction antigène-anticorps, il ne sera pas disponible pour la réaction hématies de mouton-hémolysine et il n'y aura pas d'hémolyse. Un test négatif entraînerait une hémolyse.

ré. Test immuno-enzymatique ou ELISA (également connu sous le nom de test immunoenzymatique ou EIA)

Les antigènes de test des échantillons sont passés à travers un tube (ou une membrane) recouvert des anticorps spécifiques connus correspondants et sont piégés sur les parois du tube (ou sur la membrane). Les anticorps connus auxquels une enzyme a été chimiquement attachée sont ensuite passés à travers le tube (ou la membrane) où ils se combinent avec les antigènes piégés. Le substrat pour l'enzyme attachée est ensuite ajouté et la quantité de complexe antigène-anticorps formé est proportionnelle à la quantité de réaction enzyme-substrat comme indiqué par un changement de couleur.

e. Techniques de liaison radioactive

Les antigènes de test des échantillons sont passés à travers un tube recouvert des anticorps spécifiques connus correspondants et sont piégés sur les parois du tube. Les anticorps connus auxquels un isotope radioactif a été chimiquement attaché sont ensuite passés à travers le tube où ils se combinent avec les antigènes piégés. La quantité de complexe antigène-anticorps formé est proportionnelle au degré de radioactivité.

F. Technique des anticorps fluorescents

Un colorant fluorescent est chimiquement attaché aux anticorps connus. Lorsque l'anticorps fluorescent réagit avec l'antigène, l'antigène devient fluorescent lorsqu'il est observé avec un microscope à fluorescence.

B. TESTS SÉROLOGIQUES DIRECTS : UTILISER DES RÉACTIONS ANTIGÈNE-ANTICORPS EN LABORATOIRE POUR IDENTIFIER DES ANTIGÈNES INCONNUS COMME DES MICRO-ORGANISMES.

Ce type de test sérologique utilise antisérum connu (sérum contenant des anticorps spécifiques connus). La préparation d'anticorps connus est préparée de l'une des deux manières suivantes : chez l'animal ou par des cellules d'hybridome.

1. Préparation d'antisérums connus chez les animaux.

La préparation d'un antisérum connu chez les animaux implique l'inoculation à des animaux d'antigènes connus spécifiques tels qu'une souche spécifique d'une bactérie. Une fois que les réponses immunitaires de l'animal ont eu le temps de produire des anticorps contre cet antigène, l'animal est saigné et le sang peut coaguler. La partie liquide résultante du sang est le sérum et il contiendra des anticorps spécifiques de l'antigène injecté.

Cependant, l'un des problèmes liés à l'utilisation d'anticorps préparés chez les animaux (en injectant à l'animal un antigène spécifique et en recueillant le sérum après la production des anticorps) est que jusqu'à 90 % des anticorps dans le sérum de l'animal peuvent être des anticorps que l'animal a fabriqués. "seul" contre les antigènes environnementaux, plutôt que ceux fabriqués contre l'antigène injecté. Le développement de la technique des anticorps monoclonaux a largement résolu ce problème.

2. Préparation d'anticorps connus par monoclonal technique des anticorps.

L'une des percées majeures en immunologie s'est produite lorsque la technique des anticorps monoclonaux a été développée. Des anticorps monoclonaux sont des anticorps d'un seul type spécifique. Dans cette technique, un animal est injecté avec l'antigène spécifique (voir Fig. 4, étape 1) pour l'anticorps souhaité. Après un temps approprié pour la production d'anticorps, la rate de l'animal est prélevée. La rate est riche en plasmocytes et chaque plasmocyte ne produit qu'un seul type spécifique d'anticorps. Cependant, les plasmocytes ne se développeront pas artificiellement en culture cellulaire. Par conséquent, un plasmocyte produisant l'anticorps souhaité est fusionné avec une cellule de myélome, une cellule cancéreuse de la moelle osseuse qui se développera rapidement en culture cellulaire, pour produire un cellule d'hybridome (voir Fig. 4, étape 2). La cellule d'hybridome a les caractéristiques des deux cellules mères. Ce sera produisent les anticorps spécifiques comme le plasmocyte et se développeront également facilement en culture cellulaire comme la cellule de myélome. Les cellules d'hybridome sont cultivées artificiellement dans d'immenses cuves où elles produisent de grandes quantités de l'anticorps spécifique (voir Fig. 4, étape 3).

Les anticorps monoclonaux sont maintenant utilisés en routine dans la recherche médicale et la sérologie diagnostique et sont utilisés expérimentalement dans le traitement de certains cancers et de quelques autres maladies.

3. Le concept et la procédure générale pour les tests sérologiques directs.

Le concept et la procédure générale d'utilisation des réactions antigène-anticorps pour identifier des antigènes inconnus sont les suivants :

  • Concept:

    Ce test est basé sur le fait que les réactions antigène-anticorps sont très spécifiques. Les anticorps réagissent généralement uniquement avec l'antigène qui a stimulé leur production en premier lieu, et sont tout aussi spécifiques qu'une réaction enzyme-substrat. Pour cette raison, on peut utiliser antisérum connu (préparé par inoculation animale ou technique d'anticorps monoclonal comme discuté ci-dessus) pour identifier des antigènes inconnus tels qu'un micro-organisme.

  • Procédure générale:

    Une suspension de l'antigène inconnu à identifier est mélangé avec antisérum connu pour cet antigène. On recherche alors une réaction antigène-anticorps.

Des exemples de tests sérologiques utilisés pour identifier des micro-organismes inconnus comprennent le typage sérologique de Shigella et Salmonelle (Lab 13), le typage Lancefield des bêta-streptocoques (Lab 14) et l'identification sérologique des Neisseria gonorrhoeae et Neisseria meningitidis (Lab 16). Les tests sérologiques utilisés pour identifier les antigènes qui ne sont pas des micro-organismes comprennent le typage sanguin, le typage tissulaire et les tests de grossesse.

4. Exemples de tests sérologiques directs pour identifier des antigènes inconnus

Comme indiqué ci-dessus, ce type de test sérologique utilise antisérum connu (anticorps) pour identifier des antigènes inconnus. Quatre de ces tests seront examinés en laboratoire aujourd'hui.

une. Typage sérologique de Shigella

Il y a quatre sous-groupes sérologiques différents de Shigella, correspondant chacun à une espèce différente :

  • sous-groupe A = Shigella dysenteriae
  • sous-groupe B = Shigella flexneri
  • sous-groupe C = Shigella boydii
  • sous-groupe D = Shigella sonnei

Un antisérum connu est disponible pour chacun des 4 sous-groupes de Shigella ci-dessus et contient des anticorps contre la paroi cellulaire (antigènes « O ») de Shigella. Le suspect Shigella (l'antigène inconnu) est placé dans chacun des 4 cercles sur une lame et un antisérum connu différent (A, B, C ou D) est ensuite ajouté à chaque cercle. Une réaction antigène-anticorps positive apparaît sous forme d'agglutination ou d'agglutination du Shigella (voir fig. 5).

b. Typage sérologique des streptocoques

Les Jauge Clearview® Strep A Exact II est un test sérologique qualitatif pour détection de l'antigène streptococcique du groupe A (l'antigène inconnu) directement à partir d'écouvillons de gorge et est utilisé pour aider à diagnostiquer la pharyngite streptococcique causé par Streptocoque pyogène (Streptocoques bêta du groupe A).

Le test consiste en une bande de membrane pré-enduite de anticorps de lapin anti-Strep A-conjugué de latex rouge (anticorps connu avec des particules de latex rouges attachées) situé dans un tampon au début de la bande. Il est également pré-enduit de Anticorps de lapin anti-Strep A (anticorps connu sans latex rouge attaché) qui est immobilisé sur la ligne de test où les résultats du test sont lus (voir Fig. 6A). Les particules de latex rouge attaché à l'anticorps de lapin anti-Strep A est ce qui provoque finalement la bande rouge "positive".

Lorsque la bandelette réactive est immergée dans l'échantillon extrait, le Antigène streptococcique du groupe A extrait de la Streptocoque pyogène sur l'écouvillon de gorge d'une personne atteinte d'angine streptococcique commence à se déplacer chromatographiquement vers le haut de la membrane et se lie au conjugué anticorps-latex connu de couleur rouge dans le tampon situé au début de la bande, formant un complexe antigène-anticorps Strep A (voir Fig. 6B). Ce complexe antigène-anticorps Strep A continue de remonter la membrane jusqu'à la région de la ligne de test où se trouvent les anticorps anti-Strep A de lapin immobilisés.

Si l'antigène streptococcique du groupe A est présent dans le prélèvement de gorge, un sandwich de couleur rouge d'anticorps/antigène Strep A/anticorps conjugué au latex rouge se forme dans la région de la ligne de test de la bande (voir Fig. 6C). La couleur rouge dans la région de la ligne de contrôle apparaît lorsqu'une quantité suffisante de réactif a atteint la zone de contrôle et indique que le test est terminé. Par conséquent, un test positif pour l'antigène streptococcique du groupe A apparaît sous la forme d'une bande rouge dans la zone de résultat du test et d'une bande rouge dans la zone de contrôle (voir figure 6C).

S'il n'y a pas d'antigène streptococcique du groupe A présent dans le prélèvement de gorge aucune bande rouge n'apparaît dans la zone de résultat du test de la bande et une seule bande rouge apparaît dans la zone de la ligne de contrôle, indiquant un test négatif pour l'antigène streptococcique du groupe A (voir la figure 6D).

Animation Flash montrant l'identification sérologique de
Streptocoques du groupe A, partie 1.

Version http5 de l'animation pour iPad montrant l'identification sérologique de
Streptocoques du groupe A, partie 1.

Animation Flash montrant l'identification sérologique de
Streptocoques du groupe A, partie-2.

Version http5 de l'animation pour iPad montrant l'identification sérologique de
Streptocoques du groupe A, partie-2.

c. Tests sérologiques pour diagnostiquer la grossesse

Les Jauge Alere® hCG est un test sérologique qualitatif pour détecter une grossesse précoce. L'hormone gonadotrophine chorionique humaine (hCG), produite par le placenta, apparaît dans le sérum et l'urine des femelles gravides. L'hCG est composée de deux sous-unités - alpha et bêta. La bandelette réactive Alere® hCG est un test de grossesse en une étape qui détecte des niveaux d'hCG aussi bas que 25 mlU/ml. Gonadotrophine chorionique humaine (hCG), l'antigène inconnu que l'on recherche, est identifié dans l'urine en utilisant anticorps monoclonaux de souris connus contre la sous-unité bêta de l'hCG liée à l'or colloïdal, qui est de couleur rouge. Il utilise également des anticorps polyclonaux de chèvre connus contre la sous-unité alpha de l'hCG qui est liée à la région de résultat du test de la jauge..

Comme le test Strep A mentionné ci-dessus, ce test utilise un test immunochromatographique couleur pour détecter la réaction antigène-anticorps. Le test consiste en une bande de membrane pré-enduite de Conjugué connu d'anticorps anti-bêta hCG de souris et d'or colloïdal (anticorps connu avec des particules d'or colloïdal rouge attachées) situé dans un tampon au début de la bande. Il est également pré-enduit de anticorps de chèvre anti-alpha hCG connu (anticorps connu sans or colloïdal rouge attaché) qui est immobilisé sur la ligne de test où les résultats du test sont lus (voir Fig. 7B1). Les particules d'or colloïdal rouge attachées à l'anticorps anti-alpha hCG de souris sont à l'origine de la bande rouge «positive».

Lorsque la bandelette réactive est immergée dans l'échantillon d'urine, le hCG commence à se déplacer chromatographiquement le long de la membrane et se lie au conjugué anticorps-or anti-bêta hCG connu de couleur rouge dans le tampon situé au début de la bandelette, formant un complexe antigène-anticorps hCG (voir Fig. 7B2). Ce complexe antigène-anticorps hCG continue de remonter la membrane jusqu'à la région de la ligne de test où les anticorps de chèvre anti-bêta hCG immobilisés connus sont liés.

Si de l'hCG est présente dans l'urine, un sandwich de couleur rouge de formes d'anticorps anti-bêta/antigène hCG/anticorps anti-alpha conjugué or rouge dans la région de la ligne de test de la bande (voir Fig. 7B3). Par conséquent, un test positif pour l'antigène hCG apparaît sous la forme d'une bande rouge dans la zone de résultat du test et d'une bande rouge dans la zone de contrôle (voir la figure 7B3).

S'il y a pas d'antigène hCG détectable présent dans l'urine aucune bande rouge n'apparaît dans la zone de résultat du test de la bande et une seule bande rouge apparaît dans la zone de la ligne de contrôle, indiquant un test négatif pour l'antigène hCG (voir la figure 7B4).

Animation Flash montrant l'identification sérologique de
hCG, partie 1.

Version http5 de l'animation pour iPad montrant l'identification sérologique de
hCG, partie 1.

Animation Flash montrant l'identification sérologique de
hCG, partie-2.

Version http5 de l'animation pour iPad montrant l'identification sérologique de
hCG, partie-2.

ré. Identification des micro-organismes à l'aide de la technique des anticorps fluorescents directs

Certain colorants fluorescents peut être chimiquement attaché aux molécules d'anticorps connues en antisérum. L'anticorps fluorescent connu est ensuite mélangé avec l'antigène inconnu, tel qu'un micro-organisme, fixé sur une lame. Après lavage, pour éliminer tout anticorps fluorescent non lié à l'antigène, la lame est examinée avec un microscope à fluorescence.

Si l'anticorps fluorescent a réagi avec l'antigène inconnu, l'antigène brillera ou émettra une fluorescence sous le microscope à fluorescence. Si l'anticorps n'a pas réagi avec l'antigène, les anticorps seront lavés de la lame et l'antigène ne sera pas fluorescent.

Animation Flash montrant un test d'anticorps fluorescent direct positif.

Version http5 de l'animation pour iPad montrant un test d'anticorps fluorescent direct positif.

Animation Flash montrant un test d'anticorps fluorescent direct négatif.

Version http5 de l'animation pour iPad montrant un test négatif d'anticorps fluorescent direct.

Par exemple, dans la fluorescence directe test d'anticorps pour Neisseria gonorrhoeae, mentionné brièvement dans le laboratoire 16, l'antigène inconnu, suspecté Neisseria gonorrhoeae,est fixé sur une lame de microscope. Anticorps fluorescents connus fabriqués contre N. gonorrhoeae sont ensuite ajoutés (voir Fig. 8, étape 1) et la lame est ensuite lavée pour éliminer tout anticorps fluorescent non lié à l'antigène. La lame est ensuite visualisée au microscope à fluorescence.

Si l'antigène inconnu est Neisseria gonorrhoeae, les anticorps connus contre N. gonorrhoeae avec un colorant fluorescent attaché se liera à la bactérie et ne se lavera pas. Les bactéries vont devenir fluorescentes lorsqu'elles sont observées au microscope à fluorescence (voir Fig. 8, étape 2 et Fig. 10). Si l'antigène inconnu n'est pas N. gonorrhoeae, les anticorps fluorescents connus contre seront éliminés de la lame et les bactéries ne seront pas fluorescentes lorsqu'elles seront observées au microscope à fluorescence.

De nombreuses bactéries, virus et champignons peuvent être identifiés à l'aide de cette technique.

C. TESTS SÉROLOGIQUES INDIRECTS : UTILISER DES RÉACTIONS ANTIGÈNE-ANTICORPS EN LABORATOIRE POUR DIAGNOSTIQUER INDIRECTEMENT UNE MALADIE EN DÉTECANT DES ANTICORPS DANS LE SÉRUM D'UNE PERSONNE PRODUITS CONTRE UN ANTIGÈNE DE MALADIE

Tests sérologiques indirects est la procédure par laquelle anticorps dans le sérum d'une personne fabriqués par cet individu contre un antigène associé à une maladie particulière sont détectés à l'aide d'un antigène connu.

1. Le concept et la procédure générale pour les tests sérologiques indirects.

Le concept et la procédure générale de ce type de test sérologique sont les suivants :

  • Concept:

    Ce type de test est basé sur le fait que les anticorps ne sont produits qu'en réponse à un antigène spécifique. En d'autres termes, une personne ne produira pas d'anticorps contre un antigène de maladie à moins que cet antigène ne soit présent dans le corps pour stimuler la production d'anticorps.

  • Procédure générale:

    Un échantillon du sérum du patient (la partie liquide du sang après la coagulation et contenant des anticorps contre l'antigène de la maladie si la personne a ou a eu la maladie) est mélangé avec le antigène connu pour cette maladie suspectée. On recherche alors une réaction antigène-anticorps.

    Des exemples de tests sérologiques pour diagnostiquer une maladie par la détection d'anticorps dans le sérum du patient comprennent les différents tests sérologiques pour la syphilis ou STS (tels que les tests RPR, VDRL et FTA-ABS), les tests pour la mononucléose infectieuse, les tests pour le virus de l'immunodéficience humaine (VIH), les tests pour le lupus érythémateux disséminé et les tests pour diverses autres infections virales.

2. Tests sérologiques qualitatifs et quantitatifs.

Les tests sérologiques indirects peuvent être qualitatifs ou quantitatifs. UNE qualitatif Le test ne détecte que la présence ou l'absence d'anticorps spécifiques dans le sérum du patient et est souvent utilisé à des fins de dépistage. UNE quantitatif test donne le titre ou la quantité de cet anticorps dans le sérum. Le titre indique jusqu'où vous pouvez diluer le sérum du patient tout en le faisant contenir suffisamment d'anticorps pour donner une réaction antigène-anticorps détectable. En d'autres termes, plus le corps produit d'anticorps, plus vous pouvez diluer le sérum de la personne et voir quand même une réaction. Les tests sérologiques quantitatifs sont souvent utilisés pour suivre l'évolution d'une maladie en recherchant une augmentation puis une baisse du titre d'anticorps.

3. Exemples de tests sérologiques indirects pour détecter les anticorps dans le sérum du patient

une. Le test RPR pour la syphilis

La syphilis est une maladie sexuellement transmissible causée par le spirochète Treponema pallidum. Les RPR (Rapid Plasma Reagin) Card® est un test test de dépistage sérologique présomptif pour la syphilis. Le sérum d'une personne atteinte de syphilis contient un anticorps anti-lipide non spécifique (traditionnellement appelé réagir), qui ne se trouve pas dans le sérum normal. La nature exacte de l'anticorps anti-lipide (réagine) n'est pas connue, mais on pense qu'une infection par la syphilis provoque la dégradation des propres cellules tissulaires du patient. Les matières grasses libérées se combinent ensuite avec les protéines de Treponema pallidum pour former un antigène qui stimule le corps à produire des anticorps contre les lipides tissulaires de l'organisme (non spécifiques ou non tréponémiques) ainsi que contre les T. pallidum protéine (spécifique ou tréponémique). Le test RPR Card® détecte l'anticorps antilipidique non spécifique et est appelé test non tréponémique pour la syphilis.

- micrographie électronique à balayage du spirochète Treponema pallidum; avec l'aimable autorisation du CDC.

Il faut se rappeler que les tests pour la présence de ces anticorps antilipides non spécifiques sont destinés à être un test de dépistage présomptif de la syphilis. Des anticorps similaires de type réagine peuvent également être présents à la suite d'autres maladies telles que le paludisme, la lèpre, la mononucléose infectieuse, le lupus érythémateux disséminé, la pneumonie virale, la rougeole et les maladies du collagène et peuvent donner des résultats biologiques faussement positifs (BFP). Des tests de confirmation doivent être effectués pour la présence d'anticorps spécifiques contre le T. pallidum lui-même. Le test de confirmation de la syphilis est le ALE-ABS essai discuté ci-dessous. Tout test sérologique pour la syphilis est communément appelé un STS (Test sérologique pour la syphilis).

Les antigène RPR connu consiste en cardiolipine, lécithine et cholestérol lié aux particules de charbon afin de rendre la réaction visible à l'œil nu. Si le patient a la syphilis, les anticorps antilipides de son sérum réagiront de manière croisée avec les antigènes lipidiques RPR connus, donnant un amas visible des particules de charbon (voir Fig. 1).

Nous ferons un quantitatif Test RPR Card® aujourd'hui en laboratoire. Gardez à l'esprit qu'un test quantitatif permet de déterminer la titre ou la quantité d'un certain anticorps dans le sérum. Dans ce test, une quantité constante d'antigène RPR est ajoutée aux dilutions du sérum du patient. L'échantillon le plus dilué du sérum du patient contenant encore suffisamment d'anticorps pour donner une réaction antigène-anticorps visible est indiqué comme titre.

b. Tests sérologiques pour la mononucléose infectieuse

Au cours de la mononucléose infectieuse, causée par le virus d'Epstein-Barr (EBV), le corps produit des produits non spécifiques anticorps hétérophiles qui ne se trouvent pas dans le sérum normal. Il s'avère que ces les anticorps hétérophiles réagiront de manière croisée avec les antigènes glycoprotéiques présents à la surface des globules rouges (GR) de divers animaux, y compris les chevaux, les moutons et les vaches, provoquant l'agglutinement des globules rouges. Ces antigènes glycoprotéiques à réaction croisée sont souvent appelés Antigènes de Paul-Bunnell après leurs découvreurs.

Le test sérologique de la mononucléose infectieuse démontré aujourd'hui est un test rapide qualitatif test pour la mononucléose infectieuse qui utilise Antigènes de Paul-Bunnell adsorbés sur des particules microscopiques de latex blanc sous le nom d'« antigène connu ». Ces antigènes se lient spécifiquement aux anticorps hétérophiles trouvés dans le sérum des personnes atteintes de mononucléose infectieuse provoquant l'agglutination ou l'agglutinement des particules de latex (voir Fig. Des tests quantitatifs peuvent alors être effectués pour déterminer le titre d'anticorps hétérophiles et suivre l'évolution de la maladie.

c. Tests sérologiques pour le lupus érythémateux disséminé (LED)

Le lupus érythémateux disséminé ou LED est une maladie auto-immune systémique. Des complexes immuns se déposent entre le derme et l'épiderme, et dans les articulations, les vaisseaux sanguins, les glomérules des reins et le système nerveux central. Elle est quatre fois plus fréquente chez les femmes que chez les hommes. Dans le LED, des auto-anticorps sont fabriqués contre des composants de l'ADN. Ce test est spécifique au sérum anticorps anti-désoxyribonucléoprotéine associé au LED. Les l'antigène connu est la désoxyribonucléoprotéine adsorbée sur des particules de latex pour rendre la réaction plus visible à l'œil nu (voir Fig. 3). C'est un qualitatif test utilisé pour dépister la présence de la maladie et surveiller son évolution.

ré. Détection d'anticorps à l'aide de la technique d'anticorps fluorescents indirects : le test FTA-ABS pour la syphilis

Les indirect La technique des anticorps fluorescents fait intervenir trois réactifs différents :

une. Les sérum du patient (contenant des anticorps contre l'antigène de la maladie si la maladie est présente)

b. Antigène connu pour la maladie suspectée

c. Anticorps fluorescents anti-gammaglobulines humaines (anticorps fabriqués chez un autre animal contre la portion Fc des anticorps humains (voir Fig. 9) en injectant à un animal du sérum humain. Un colorant fluorescent est ensuite chimiquement attaché aux anticorps anti-gammaglobuline humaine (anti-HGG).

Les Test FTA-ABS (Test d'absorption d'anticorps tréponémiques fluorescents) pour la syphilis est un exemple de procédure d'immunofluorescence indirecte. C'est un test de confirmation pour la syphilis car il teste spécifiquement pour des anticorps dans le sérum du patient fabriqués en réponse au spirochète de la syphilis, Treponema pallidum.

Dans ce test, tué T. pallidum,(l'antigène connu), est fixé sur une lame (voir Fig 4, étape 1). Le sérum du patient est ajouté à la lame. Si le patient a la syphilis, des anticorps contre le T. pallidum réagira avec l'antigène sur la lame (Fig. La lame est ensuite lavée pour éliminer tous les anticorps non liés au spirochète.

Pour rendre cette réaction visible, un deuxième anticorps d'origine animale fabriqué contre des anticorps humains et marqué avec un colorant fluorescent (fluorescent anti-humain gamma globuline) est ajouté. Ces anticorps fluorescents anti-HGG réagissent avec les anticorps du patient qui ont réagi avec le T. pallidum sur la glissière (Fig. 4, étape 3). La lame est lavée pour éliminer tous les anticorps anti-HGG fluorescents non liés et observée avec un microscope à fluorescence. Si les spirochètes brillent ou émettent une fluorescence (voir Fig. 5), le patient a produit des anticorps contre T. pallidum et a la syphilis.

Animation Flash du test FTA-ABS pour la syphilis.

Version http5 de l'animation pour iPad montrant le test FTA-ABS pour la syphilis.

Un autre exemple de test d'anticorps fluorescent indirect est le test de anticorps contre le virus de la rougeole. Les cellules inactivées infectées par le virus de la rougeole (l'antigène connu) sont fixées sur une lame de microscope. Le sérum du patient est ensuite ajouté. Si la personne a la rougeole, des anticorps de l'isotype IgG seront fabriqués contre le virus de la rougeole et se lieront aux épitopes viraux sur les cellules connues infectées par le virus de la rougeole. Après avoir lavé la lame pour éliminer toute IgG non liée, une IgG antihumaine fluorescente est ajoutée. L'IgG antihumaine fluorescente se lie alors à l'IgG du patient qui est liée aux cellules infectées. Lorsqu'elles sont vues avec un microscope à fluorescence, les cellules infectées deviennent vertes fluorescentes.

e. Les tests sérologiques EIA et Western Blot pour les anticorps contre le virus de l'immunodéficience humaine (VIH)

Dans le cas des tests actuels d'anticorps anti-VIH, le sérum du patient est mélangé avec divers antigènes du VIH produits par la technologie de l'ADN recombinant. Si la personne est séropositive (a des tests antigène-anticorps positifs répétés), alors le VIH doit être dans le corps de cette personne pour stimuler la production d'anticorps. En d'autres termes, la personne doit être infectée par le VIH. Les deux tests les plus couramment utilisés pour détecter les anticorps contre le VIH sont le dosage immunoenzymatique ou EIA (également connu sous le nom de dosage immuno-enzymatique ou ELISA) et le Western blot ou WB. Une personne n'est considérée comme séropositive pour l'infection à VIH qu'après qu'un test de dépistage EIA ait été réactif à plusieurs reprises et qu'un autre test tel que le WB ait été effectué pour confirmer les résultats.

Les EIE est moins chère, plus rapide et techniquement moins compliquée que la BM et est la procédure initialement effectuée comme test de dépistage de l'infection par le VIH. Les différents tests EIA donnent une lecture spectrophotométrique de la quantité d'anticorps se liant aux antigènes connus du VIH.

Le kit de test EIA contient des puits en plastique dans lesquels divers antigènes du VIH ont été adsorbés (voir Fig. 6, étape 1). Les sérum du patient est ajouté aux puits et tous les anticorps présents dans le sérum contre les antigènes du VIH se lieront aux antigènes correspondants dans les puits (Fig. 6, étape 2). Les puits sont ensuite lavés pour éliminer tous les anticorps du sérum autres que ceux liés aux antigènes du VIH. Anticorps anti-gammaglobuline humaine (anti HGG) liés à une enzyme sont ensuite ajoutés aux puits. Ces anticorps, fabriqués chez un autre animal contre la portion Fc des anticorps humains en injectant à l'animal du sérum humain, ont une enzyme liée chimiquement. Ils réagissent avec les anticorps humains liés aux antigènes connus du VIH (Fig. 6, étape 3). Les puits sont ensuite lavés pour éliminer tout anti-HGG qui ne s'est pas lié aux anticorps sériques. UNE substrat spécifique de l'enzyme est ensuite ajouté et la réaction enzyme-substrat qui en résulte provoque une changement de couleur dans les puits (Fig. 6, étape 4). S'il n'y a pas d'anticorps dans le sérum du patient contre le VIH, il n'y aura rien pour que l'anti-HGG lié à une enzyme se lie et il sera lavé des puits. Lorsque le substrat est ajouté, il n'y aura pas d'enzyme présente dans les puits pour donner un changement de couleur.

Animation flash du test EIA pour les anticorps contre le VIH.

Version http5 de l'animation pour iPad montrant le test EIA pour les anticorps contre le VIH.

Si l'EIE initiale est réactive, il est répété automatiquement pour réduire la possibilité qu'une erreur technique du laboratoire ait causé le résultat réactif. Si l'EIE est toujours réactive, il est alors confirmé par le test Western blot.

Les Western blot WB est le test le plus couramment utilisé comme test de confirmation si l'EIA est positif à plusieurs reprises. Le WB est techniquement plus complexe à réaliser et à interpréter, prend plus de temps et coûte plus cher que les EIA.

Avec le WB, les différents antigènes protéiques et glycoprotéiques du VIH sont séparés selon leur poids moléculaire par électrophorèse sur gel (procédure qui sépare les protéines chargées dans un gel en appliquant un champ électrique). Une fois séparés, les différents antigènes VIH sont transférés sur une bandelette de nitrocellulose (voir Fig. 7, étape 1 et Fig. 7, étape 2). Le sérum du patient est ensuite incubé avec la bandelette et tous les anticorps anti-VIH présents se lieront aux antigènes du VIH connus correspondants sur la bandelette (Fig. 7, étape 3). Anticorps anti-gammaglobuline humaine (anti HGG) liés à une enzyme sont ensuite ajoutés à la bande. 7, étape 4). La bandelette est ensuite lavée pour éliminer tout anti-HGG qui ne s'est pas lié aux anticorps sériques. UNE substrat spécifique de l'enzyme est ensuite ajouté et la réaction enzyme-substrat qui en résulte provoque une changement de couleur sur la bande (Fig. 7, étape 5). S'il n'y a pas d'anticorps dans le sérum du patient contre le VIH, il n'y aura rien pour que l'anti-HGG lié à l'enzyme se lie et il sera lavé de la bandelette. Lorsque le substrat est ajouté, il n'y aura aucune enzyme présente sur la bande pour donner un changement de couleur.

Animation flash du test WB pour les anticorps contre le VIH.

Version http5 de l'animation pour iPad montrant le test WB pour les anticorps contre le VIH.

Il convient de mentionner que tous les tests sérologiques sont capables de donner occasionnellement résultats faux positifs et faux négatifs. La cause la plus fréquente d'un test d'anticorps VIH faussement négatif est lorsqu'une personne n'a été infecté que récemment par le VIH et son corps n'a pas encore produit des quantités suffisantes d'anticorps pour donner un test sérologique positif visible. Il faut généralement entre 2 semaines et 3 mois après qu'une personne est initialement infectée par le VIH pour se convertir à un test d'anticorps VIH positif.

Un certain nombre de tests VIH rapides commerciaux ont également été améliorés pour détecter les anticorps contre le VIH. Ils comprennent:

  • OraQuick Advance HIV1/2® : utilise soit un échantillon de sang prélevé au doigt, soit un échantillon buccal.
  • Uni-Gold Recombigen® : utilise soit une piqûre au doigt, soit un échantillon de sang total.
  • Reveal G2® : Utilise du sérum ou du plasma.
  • Multispot HIV-1/HIV-2® : Utilise du sérum ou du plasma.

Pour plus d'informations sur le VIH et le SIDA, consultez les objets d'apprentissage suivants dans votre guide de cours :

  • Unité 4, Section IVF3 : Le cycle de vie du VIH

PROCÉDURE

PROCÉDURE DE TESTS SÉROLOGIQUES DIRECTS POUR DÉTECTER DES ANTIGÈNES INCONNUS

A. Typage sérologique de Shigella

1. À l'aide d'un marqueur de cire, dessinez deux cercles (environ la taille d'un nickel) sur chacune des deux lames de verre propres . Étiquetez les cercles A, B, C et D.

2. Ajouter une baisse du soupçonné Shigella(antigène inconnu) à chaque cercle. (Les Shigella a été traité au formol pour le rendre non infectieux mais toujours antigénique.)

3. Ajoutez maintenant une baisse du sous-groupe Shigella connu UNE antisérum au cercle "A", une baisse de connu Shigella sous-groupe B antisérum au cercle "B", une baisse de connu Shigella sous-groupe C antisérum au cercle "C", et une baisse de connu Shigella sous-groupe antisérum au cercle "D".

4. Tourner la diapositive avec précaution pour 30-60 secondes.

L'agglutination des bactéries, indique une réaction positive.

Aucune agglutination n'est négative.

5. Jetez toutes les pipettes et lames dans le conteneur de désinfectant.

B. Typage sérologique des streptocoques: Les Test de bandelette Clearview® Strep A Exact II

1. Ajouter 4 gouttes de réactif d'extraction n°1 au tube d'extraction. Ce réactif contient du nitrite de sodium 2M et doit être de couleur rose à violet.

2. Ajouter 4 gouttes de réactif d'extraction #2 au tube d'extraction. Ce réactif contient 0,3M d'acide acétique. La solution doit virer au jaune.

3. Placez le tampon de gorge dans le tube d'extraction et le rouler avec un mouvement circulaire à l'intérieur du tube. Laisser reposer au moins 1 minute.

4. Pressez fermement l'écouvillon contre le tube d'extraction pour expulser autant de liquide que possible de l'écouvillon et jetez l'écouvillon dans le conteneur de déchets biologiques.

5. Immerger la bandelette réactive dans le tube d'extraction avec les flèches pointant vers la solution échantillon extraite. Laissez la bandelette dans le tube et commencez à chronométrer.

6. Lire les résultats en 5 minutes. Une bande rouge dans la zone de contrôle et une bande rouge dans la zone de test indiquent un test positif (Voir fig. Une seule bande rouge dans la région de contrôle indique uniquement un test négatif (Voir la figure 6D). Aucune bande colorée dans la région de contrôle n'indique un test invalide.

C. Tests sérologiques pour détecter la grossesse: La jauge hCG d'Alere®

1. Trempez la jauge d'hCG dans l'urine jusqu'à la ligne maximale sur la bande pendant 5 secondes.

2. Placer la jauge de test sur une surface plane et non absorbante et lire les résultats à 3-4 minutes. Ne pas interpréter après le temps de lecture approprié.

3. Si l'hCG est présente dans l'urine à une concentration de 25 mlU/ml ou plus, une test positif, une ligne de test rose à rouge apparaîtra avec une ligne de contrôle rouge dans la fenêtre de résultat (voir Fig. Si l'hCG est absente ou présente à des niveaux très bas, un test négatif, seule une ligne de contrôle rouge apparaît dans la fenêtre de résultats (voir Fig. 7B4).

D. La technique des anticorps fluorescents directs

Observer la démonstration d'un test d'anticorps fluorescent direct positif pour Neisseria gonorrhoeae .

PROCÉDURE DE TEST SÉROLOGIQUE INDIRECT POUR DÉTECTER LES ANTICORPS DANS LE SÉRUM DU PATIENT

A. Le test de carte RPR® pour la syphilis (manifestation)

1. Étiquetez 6 tubes à essai comme suit : 1:1, 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 et 1:32.

2. À l'aide d'une pipette de 1,0 ml, ajoutez 0,5 ml de solution saline à 0,9% en tubes 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 et 1:32.

3. Ajouter 0,5 ml de sérum du patient à la 1:1 tube (sérum non dilué).

4. Ajoutez un autre 0,5 ml de sérum à la solution saline dans le 1:2 tube et mélanger. Supprimer 0,5 ml du tube 1:2 et l'ajouter au 1:4 tube et mélanger. Supprimer 0,5 ml du tube 1:4, ajouter au 1:8 tube et mélanger. Supprimer 0,5 ml du tube 1:8, ajouter au 1:16 tube et mélanger. Supprimer 0,5 ml du tube 1:16, ajouter au 1:32 tube et mélanger. Supprimer 0,5 ml du tube 1:32 et Jeter. La dilution du sérum est résumée sur la figure 8.

5. A l'aide des pipettes capillaires fournies avec le kit, ajouter une goutte de chaque dilution de sérum pour séparer les cercles de la carte RPR. Étaler le sérum sur toute la surface interne du cercle avec la pointe de la pipette, en utilisant une nouvelle pipette pour chaque dilution de sérum.

6. À l'aide du distributeur d'antigène RPR, ajoutez une goutte d'antigène RPR connu à chaque cercle. Ne laissez pas l'aiguille du distributeur toucher le sérum. À l'aide d'agitateurs jetables, mélanger l'antigène RPR connu avec le sérum dans chaque cercle.

7. Placez la lame sur un agitateur et tourner pendant un maximum de 4 minutes.

8. Lisez les résultats comme suit :

  • Une agglutination définie des particules de charbon de bois est signalée comme réactif (R).
  • Aucun agglutination n'est signalé comme non réactif (N).

La plus grande dilution de sérum qui produit un réactif le résultat est le titre. Par exemple, si les dilutions s'avéraient comme suit, le titre serait rapporté comme 1:4 ou 4 dils.

1:11:21:41:81:161:32

R

R

R

N

N

N

B. Les tests sérologiques de la mononucléose infectieuse (manifestation)

1. Placer une goutte de chacun des sérums du patient en cercles sur la lame de test.

2. Ajouter une goutte de particules de latex traitées contenant des antigènes de Paul-Bunnell à leur surface (l'antigène connu) à chaque cercle et mélanger avec des bâtonnets applicateurs jetables.

3. Basculez la carte doucement pendant 3 minutes, et observer l'agglutination des particules de latex. L'agglutination indique la présence de anticorps hétérophiles (voir fig. 2).

C. Les tests sérologiques pour le lupus érythémateux disséminé (LED) (manifestation)

1. Ajouter une goutte de chacun des sérums du patient pour séparer les cercles sur la lame de test.

2. Ajouter une goutte de réactif Latex-Déoxyribonucléoprotéine (l'antigène connu, la désoxyribonucléoprotéine adsorbée sur les particules de latex) à chaque échantillon de sérum et mélanger avec des bâtonnets applicateurs jetables.

3. Faites basculer le toboggan doucement pendant 3 minutes et recherchez l'agglutination des particules de latex. L'agglutination indique la présence de anticorps antinucléaires associé au LED (voir Fig. 3).

D. Le test FTA-ABS pour la syphilis (technique des anticorps fluorescents indirects

Observer la lame de 35 mm d'un test FTA-ABS positif (voir Fig. 5).

E. Les tests EIA et WB pour les anticorps anti-VIH

Observez les illustrations des tests EIA et WB pour les anticorps contre le VIH.

RÉSULTATS

RÉSULTATS DES TESTS SÉROLOGIQUES DIRECTS POUR DÉTECTER DES ANTIGÈNES INCONNUS

A. Typage sérologique de Shigella

Faites un dessin de vos résultats.

  • L'agglutination des bactéries est positive.
  • Aucune agglutination de bactéries n'est négative.

Shigella diapositive de saisie

B. Typage sérologique des streptocoques : Jauge Clearview® Strep A Exact II

Faites un dessin de vos résultats.

C. Tests sérologiques pour diagnostiquer la grossesse : Jauge Alere® hCG

Faites un dessin d'un test de grossesse positif.

D. La technique des anticorps fluorescents directs

Faites un dessin et décrivez un test d'anticorps fluorescent direct positif.

Test d'anticorps fluorescent direct positif
pour Neisseria gonorrhoeae

RÉSULTATS DES TESTS SÉROLOGIQUES INDIRECTS POUR DÉTECTER LES ANTICORPS DANS LE SÉRUM DU PATIENT

A. Test RPR Card® pour la syphilis (quantitatif)

Détecte les anticorps antilipidiques non tréponémiques (réagine)

Notez vos résultats dans le tableau.

DilutionRésultat
1:1
1:2
1:4
1:8
1:16
1:32
Titre

R = réactif (blocs distincts)
N = non réactif (pas de grumeaux)

B. MONO-TEST pour la Mononucléose Infectieuse (Qualitatif)

Détecte les anticorps hétérophiles.

Dessinez les résultats d'un test positif et d'un test négatif.

Lame de test de la mononucléose infectieuse
+ = Agglutination des particules de latex
- = Pas d'agglutination des particules de latex

C. Test sérologique pour le LED (qualitatif)

Détecte les anticorps anti-désoxyribonucléoprotéine.

Dessinez les résultats d'un test positif et d'un test négatif.

Lame de test SLE
+ = Agglutination
- = Pas d'agglutination

D. Test FTA-ABS pour la syphilis (confirmation)

Détecte les anticorps contre Treponema pallidum

Dessinez les résultats d'un test FTA-ABS positif.

Test FTA-ABS positif pour la syphilis
(spirochètes fluorescents)


Lab 17 : Sérologie, Tests sérologiques directs et indirects - Biologie

Au cours des dernières années, les IgG intraveineuses (IVIgG) ont acquis une grande importance dans le traitement des états d'immunodéficience et des troubles auto-immuns, dans la prophylaxie de l'iso-immunisation Rh et dans la prophylaxie des patients transplantés de moelle osseuse pour diminuer les infections (1-3). Il est important de réaliser cependant qu'il existe des problèmes de tests de laboratoire cliniques associés à l'utilisation d'IVIgG. Ces problèmes incluent ceux provoqués par la contamination par des alloanticorps viraux et érythrocytaires (RBC) des préparations d'IVIgG (tableau 1).

Tableau 1. Anticorps pouvant être présents dans les préparations d'IVIgG
TétanosAnti-A et anti-B
RougeoleAnti-A
Noyau de l'hépatite BAnti-B
CytomégalovirusAnti-D
Hépatite AAnti-K
Antigène de surface de l'hépatite BAnticorps (anticorps) qui réagissent avec tous les globules rouges testés
Hépatite CAnticorps plaquettaires (?)
De nombreux autres anticorps contre les bactéries, virus, etc.Anticorps lymphocytotoxiques (?)

Les préparations d'IVIgG sont extraites de grands pools de donneurs de plasma volontaires (plus de 10 000 donneurs/pool) conformément aux réglementations strictes de la Food and Drug Administration (FDA) des États-Unis et aux normes et directives de l'Organisation mondiale de la santé (OMS). L'IVIgG est extrait par un procédé de fractionnement à l'alcool à froid, le produit final présente 96 à 98 % des caractéristiques électrophorétiques de la gammaglobuline. Les fabricants ajoutent diverses quantités de composés biochimiques pour obtenir l'isotonie, des plages de pH spécifiques, la stabilité et la solubilité (4-16). IVIgG contient également des quantités variables d'IgA (de 0,4 à 720 mg/mL, selon le fabricant). Ceci est important à garder à l'esprit lors du traitement de patients qui peuvent être déficients en IgA (3).

Après la perfusion, l'IVIgG devient disponible dans la circulation presque immédiatement. On estime qu'après 6 jours, les concentrations extravasculaires et intravasculaires des IVIgG sont égalisées. Bien que la demi-vie physiologique des IgIV soit d'environ 22 jours, il a été observé qu'elle s'étendait à plus de 30 jours chez les patients immunodéficients (13). Encore une fois, les IVIgG préparées par différents fabricants doivent se conformer aux directives strictes de l'OMS et de la FDA, aux normes de production et aux contrôles de qualité, qui incluent des niveaux minimaux attendus d'anticorps contre l'antigène de surface de l'hépatite B (HBsAg) et le virus de l'hépatite A (4).

Les préparations d'IVIgG contiennent les différentes sous-classes d'IgG dans des proportions similaires à celles du plasma normal. L'importance des sous-classes d'IgG dans le traitement substitutif est significative, car de nombreux processus pathologiques et infectieux semblent être associés à des déficiences dans des sous-classes d'IgG spécifiques (17-23). Cependant, les préparations d'IVIgG dérivées des grands pools de donneurs de plasma décrits ci-dessus contiennent également un large spectre d'anticorps dirigés contre des micro-organismes viraux, bactériens et autres. De plus, ils contiennent inévitablement des anticorps contre les antigènes érythrocytaires, ce qui peut produire des résultats faussement positifs lors du bilan des patients dépendants des transfusions (24) (tableau 1).

Par conséquent, la présence d'alloanticorps dans les préparations d'IVIgG est préoccupante en raison des ravages qu'elle peut causer sur les résultats des tests sérologiques et de compatibilité. L'une des préoccupations les plus évidentes est la contamination par des anticorps dirigés contre le virus de l'immunodéficience humaine (VIH) et le virus de l'hépatite C. Ici, au service de transfusion du M. D. Anderson Cancer Center, nous avons récemment étudié les préparations d'IVIgG utilisées par notre service. Dans une étude publiée en 1991, nous avons testé 165 lots d'IVIgG de différents fabricants (24) (tableau 2). Dans une étude plus récente, nous avons analysé 51 lots d'IVIgG (données non publiées). Des diminutions nettes des niveaux de contamination ont pu être observées en comparant nos deux ensembles de données. Par exemple, contrairement aux lots précédents, aucun des lots actuels n'était réactif au virus de l'immunodéficience humaine 1/2 (VIH-1/2) ou à la réagine plasmatique rapide. Quarante-sept des lots de l'étude la plus récente étaient réactifs pour les anticorps contre l'hépatite C, mais à l'avenir, nous nous attendons à voir moins de réactivité contre l'hépatite C à la lumière d'une nouvelle exigence de la FDA pour le dépistage des donneurs et le traitement du plasma. Il est donc important de ne pas négliger ni de réagir de manière excessive à la réactivité des anticorps de l'hépatite C chez un patient recevant des IgIV. De toute évidence, le dépistage de l'hépatite et du cytomégalovirus (CMV) pourrait également produire des résultats ininterprétables.

Tableau 2. Liste partielle des anticorps pour les marqueurs de maladies infectieuses testés et identifiés dans divers lots d'IVIgG
Non beaucoup de positif
1986-1990
(n=165)
1991-1992
(n=51)
Surface de l'hépatite B165100%51100%
Noyau de l'hépatite B16097%2141%
Cytomégalovirus15896%51100%
Hépatite A totale165100%Pas testé
VIH-16439%Pas testé
VIH-1/2Pas testé00%
Réagine plasmatique rapide4820%00%
Hépatite CPas testé4792%

Une autre préoccupation, en particulier chez les patients transplantés de moelle osseuse, est la présence d'alloanticorps érythrocytaires (tableaux 3 et 4). Depuis l'introduction récente des IgIV pour la prophylaxie du CMV chez les receveurs de greffe de moelle osseuse, un certain nombre de rapports ont décrit une incidence accrue de tests positifs directs et indirects à l'antiglobuline, des résultats sérologiques confus dans les tests prétransfusionnels et de rares cas d'hémolyse (25-29). Dans une étude de Robertson et al. des résultats sérologiques chez 47 patients transplantés de moelle osseuse qui ont reçu des doses élevées d'IVIgG (25), la fréquence des résultats positifs directs à l'antiglobuline était de 48,9 % (P inférieur à 0,001) contre 12,8 % pour un groupe témoin ne recevant pas d'IVIgG. La fréquence des résultats positifs au test indirect à l'antiglobuline était de 25,5% (P inférieur à 0,001) dans le groupe IgIV versus 4,3 % dans le groupe non IgIV. Les spécificités d'anticorps les plus fréquemment identifiées dans le sérum et l'éluat étaient anti-A ou anti-B, suivies de l'anti-D et de l'anti-K. Dans un test de 46 lots d'IVIgG pour les anticorps contre les antigènes des groupes sanguins par Garcia et al. (26), des anti-A ou des anti-B ont été détectés dans 88 % des lots, et de l'anti-globuline humaine indirecte a été détectée dans 63 % des lots. Comme les préparations d'IVIgG, comme nous l'avons souligné, sont fabriquées à partir de grands pools de plasma de donneurs, elles peuvent contenir des quantités variables d'isoagglutinines et d'autres alloanticorps courants tels que les anti-D et les anti-K (5,30). Les titres rapportés d'isoagglutinines ou d'anti-D dans les préparations d'IVIgG vont de 0 à 128 (5,31,32) (tableau 5).

Tableau 3. Isohémagglutinines dans les lots d'IVIgG
Non beaucoup de positif
1986-1990
(n=165)
1991-1992
(n=49)*
Anti-A et anti-B11771%2959%
Anti-A2012%1327%
Anti-B85%48%
Pas d'isohémagglutinine2012%36%

*Deux lots de 51 non testés.

Tableau 4. Alloanticorps RBC dans les lots d'IVIgG
Nombre de lots
1986-1990
(n=165)
1991-1992
(n=47)*
Aucune preuve d'alloanticorps de RBC8451%817%
Alloanticorps RBC présents8149%3983%

*Quatre lots de 51 non testés.

Tableau 5. Alloanticorps RBC testés et identifiés dans des lots d'IVIgG, 1986-1990 et 1991-1992
Non beaucoup de positif
1986-1990
(n=81)
1991-1992
(n=39)
Anti-D3847%923%
Anti-K22%13%
Anti-CPas de données13%
Anti-K, anti-D et anti-LebPas de données13%
Anti-K, anti-D, anti-Leb et anti-CPas de données13%
Anti-C et anti-DPas de données13%
Non identifiablePas de données718%
Anti-K et non identifiablePas de données25%
Anti-D et anti-K22%615%
Anti-D et non identifiable1215%821%
Anti-D, anti-K et non identifiablePas de données1231%
Avec alloanticorps spécifiques de RBC4859%Pas de données
Réactif avec toutes les cellules testées2835%Pas de données
Alloanticorps RBC non identifiables1316%Pas de données

En plus des IVIgG, d'autres agents immunosuppresseurs thérapeutiques qui ont des effets similaires à ceux des IVIgG et sont utilisés chez les patients transplantés de moelle osseuse, tels que la globuline anti-lymphocytaire et la globuline anti-thymocytes, peuvent créer des problèmes lors des tests de compatibilité. Par exemple, dans une série de 37 patients étudiés par Swanson et al., 8 avaient des tests d'antiglobuline directs positifs et des tests d'anticorps RBC positifs, 15 ont développé des anticorps RBC détectables à température ambiante, 4 ont développé des anticorps RBC détectables à 37 degrés Celsius dans l'albumine, et 33 ont développé des anticorps RBC détectables dans la phase anti-globuline humaine (33). Les problèmes de compatibilité ont été résolus en adsorbant la globuline anti-humaine avec des globules rouges recouverts de globuline anti-lymphocytaire, ce qui a permis d'éliminer la substance de la globuline anti-lymphocytaire réagissant avec la globuline anti-humaine.

Les épisodes hémolytiques résultant d'anticorps IgG acquis passivement sont un autre problème dans l'administration d'IVIgG, bien que de tels épisodes soient généralement légers et spontanément résolutifs. Par exemple, Robertson et al., dans leur étude sur 47 receveurs de greffe de moelle osseuse après traitement par IgIV, n'ont observé aucune hémolyse significative associée au transfert passif d'anticorps (25). D'autre part, un rapport récent de Copelan et al. ont décrit deux patients qui présentaient une hémolyse cliniquement significative après avoir reçu de fortes doses d'IVIgG (27). Un de ces deux patients a eu un épisode aigu d'hémolyse après avoir reçu deux lots d'IVIgG. Anti-A et anti-D ont été trouvés dans l'éluat de GR du patient et des titres d'anti-A et d'anti-D de 32 et 2, respectivement, ont été démontrés dans les lots d'IVIgG. Bien qu'il ait été supposé que de faibles titres d'anticorps dans les préparations d'IVIgG ne provoquent pas d'hémolyse cliniquement significative chez les patients (32), les deux rapports de cas de Copelan et al. illustrent de rares exceptions (27).

Les isohémagglutinines posent un autre problème. Nous et d'autres avons signalé précédemment la présence non inattendue d'isohémagglutinines dans les préparations d'IVIgG (24,34). La présence de ces anticorps, cependant, impose une lourde charge sur la logistique de l'approvisionnement en sang, en particulier dans le cas des patients IVIgG-dépendants. Si ces patients sont également dépendants des transfusions, alors dans la plupart des cas, ils doivent recevoir du sang O, Rh-. À cet égard, il serait donc très utile et logique que les fabricants de préparations d'IVIgG adsorbent ces anticorps. Cependant, bien que la technologie pour le faire soit disponible, une telle élimination des anticorps n'est apparemment pas requise par la FDA, selon les représentants des fabricants.

Il est intéressant de noter que dans notre étude de 1991, environ 50% des préparations d'IVIgG n'ont montré aucune preuve d'alloanticorps de RBC (24). Cependant, dans notre revue la plus récente, seulement 17% des préparations d'IVIgG étaient exemptes de ces anticorps. La raison de cela n'est pas encore claire pour nous.

La liste des alloanticorps RBC discutés ici n'est pas exhaustive et ne représente que l'étendue de nos tests. Pourtant, tous les alloanticorps dont nous avons discuté obscurcissent le tableau immunohématologique et mettent davantage à rude épreuve le processus visant à assurer un approvisionnement sûr en composants sanguins pour les patients dépendants des transfusions (tableaux 4 à 6).

Tableau 6. Impact des IgIV sur le laboratoire clinique et le service de transfusion
Les patients sous IVIgG peuvent donner des résultats faussement positifs dans les tests basés sur les IgG.
Le service de transfusion est obligé d'utiliser des méthodes élaborées pour identifier les alloanticorps des globules rouges.
Les patients dépendants des transfusions sous IVIgG épuisent l'inventaire sanguin O, Rh-négatif.

Notre analyse plus récente des lots d'IVIgG a montré que d'autres anticorps, tels que les anticorps anti-C, anti-c et anti-Leb, compliquent également davantage le bilan et l'assistance des patients dépendants simultanément d'un traitement par IVIgG et de transfusions. Pour gérer efficacement une telle situation, le service de transfusion d'un hôpital doit être au courant des patients recevant des IgIV.Dans les hôpitaux où la pharmacie dispense des IgIV, ce n'est pas si simple des liens d'information doivent être établis entre la pharmacie et le service de transfusion pour fournir les noms de chaque patient recevant des IgIV, la posologie des IgIV, le numéro de lot et la date de la perfusion. Cependant, dans d'autres contextes dans lesquels le service de transfusion lui-même dispense des IgIV, il est très facile et pratique pour le service de garder une trace de qui l'obtient.

Dans notre établissement, les flacons d'IVIgG vides sont conservés par la pharmacie et livrés immédiatement au service de transfusion chaque fois qu'un patient reçoit une perfusion d'IVIgG. Notre service transfusionnel enregistre alors le numéro de lot et la date de perfusion d'IVIgG dans le dossier du patient. Le service de transfusion est également généralement en mesure de récupérer suffisamment d'IVIgG dans les flacons vides pour rechercher dans les lots la présence d'allo-anticorps érythrocytaires. Par la suite, lors de la réception d'une demande de transfusion pour tout patient enregistré, une recoupement rapide du dossier transfusionnel par le personnel du service transfusionnel peut alerter celui-ci sur d'éventuels problèmes sérologiques. Souvent, les profils d'anticorps détectés dans les lots d'IVIgG ressemblent à ceux trouvés dans le sérum et l'éluat des patients recevant des IVIgG. Par conséquent, le service de transfusion doit enquêter de manière approfondie sur les profils d'anticorps sériques sanguins de tous les patients transplantés afin de déterminer le type de solutions d'IVIgG à administrer. Ces étapes sont précieuses pour résoudre des problèmes sérologiques complexes.

Inévitablement, le laboratoire clinique doit établir des méthodes et des procédures pour éviter les pièges de faux positifs déclenchés par les perfusions d'IVIgG. D'autre part, le service de transfusion doit rechercher des informations sur les patients recevant un traitement par IgIV afin que les schémas hémothérapeutiques appropriés puissent être fournis en temps opportun. Par conséquent, le laboratoire clinique et le service de transfusion doivent tous deux être dans la boucle d'information concernant les patients recevant des IgIV. De plus, chaque lot d'IVIgG utilisé doit être analysé pour déterminer quels anticorps contaminants peuvent être présents et peuvent produire des résultats de tests de laboratoire erronés, résultats qui peuvent à leur tour déclencher des spéculations cliniques injustifiées et la commande de procédures thérapeutiques et diagnostiques supplémentaires mais inutiles.

Lorsqu'ils traitent avec les IgIV, le laboratoire clinique, la pharmacie, le service de transfusion, le médecin traitant et le personnel infirmier doivent tous disposer de canaux de communication et d'information ouverts pour éviter des tests et des bilans inutiles chez ces patients. Comme indiqué ci-dessus, les professionnels de la clinique et de la transfusion qui s'occupent de patients déficients en IgA doivent être particulièrement vigilants lorsqu'ils utilisent des préparations d'IVIgG, car ces préparations peuvent contenir diverses quantités d'IgA et étant donné que la perfusion d'IVIgG chez un patient déficient en IgA avec des anticorps IgA peut déclencher une réaction anaphylactique sévère.

Une autre mise en garde concerne les réactions allergiques transfusionnelles qui peuvent survenir pendant ou après une perfusion post-transfusionnelle d'IVIgG. Il peut arriver qu'un personnel infirmier oublie la perfusion d'IgIV dans de tels cas et signale seulement que le patient en question a reçu un type de transfusion. Bien que la réaction transfusionnelle ne doive pas être négligée, le fait de savoir que l'IVIgG a été perfusé aiderait clairement à comprendre la réaction allergique.

Sans aucun doute, la thérapie IVIgG est une modalité en constante expansion. Les patients qui en reçoivent éprouvent des effets bénéfiques, et la liste des entités pathologiques dans lesquelles les IgIV peuvent être essayées et administrées est actuellement illimitée. Dans cette perspective, le laboratoire clinique et le service de transfusion doivent développer une stratégie proactive pour faire face aux interférences de tests induites par les perfusions d'IVIgG.

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ENJEUX ACTUELS EN MÉDECINE TRANSFUSIONNELLE
Tome 3, numéro 2
Copyright 1995 Centre de lutte contre le cancer M.D. Anderson de l'Université du Texas, Houston, Texas


L'HISTOIRE

Test de Wassermann ou réaction de Wassermann

C'était le premier test sanguin pour la syphilis et le premier test de la catégorie des tests non tréponémiques (NTT) développé par Wassermann, Julius Citron et Albert Neisser en 1906.

Il est basé sur le principe de fixation du complément dans lequel un échantillon de sang ou de LCR a été prélevé et introduit dans l'antigène qui était la cardiolipine extraite du muscle ou du cœur de bovin. Les anticorps non spécifiques tréponémiques réagissent avec le lipide – la réaction de Wassermann (WR) des anticorps antiphospholipides (APA)

L'intensité de la réaction (classée 1, 2, 3 ou 4) indique la gravité de l'affection

Les NTT plus récents, tels que les tests rapides de réagine plasmatique (RPR) et VDRL, l'ont pour la plupart remplacé.


Résumé et contexte

Résumé

Les tests sérologiques pour le coronavirus 2 du syndrome respiratoire aigu sévère (SRAS-CoV-2) sont désormais largement disponibles. Contrairement aux tests d'amplification d'acide nucléique (TAAN) qui détectent l'ARN viral, les tests basés sur les anticorps mesurent la réponse immunitaire humorale de l'hôte à une infection actuelle ou passée. Les anticorps anti-SARS-CoV-2 deviennent généralement détectables plus de deux semaines après le début des symptômes (Figure 1). En conséquence, la sérologie SARS-CoV-2 manque de sensibilité suffisante pour exclure en toute confiance le diagnostic de la maladie à coronavirus 2019 (COVID-19) lorsque les anticorps ne sont pas détectés dans la phase aiguë de la maladie. Le TAAN reste la modalité diagnostique de choix pour l'infection aiguë. Les tests d'anticorps, cependant, peuvent être utiles en complément du TAAN à des moments ultérieurs après l'infection. En général, les tests IgM ont tendance à avoir une sensibilité plus faible pour détecter une infection passée que les tests IgG ou les anticorps totaux. Tests conçus pour détecter et différencier les IgM et IgG en combinaison, où la détection d'IgM ou d'IgG est utilisée pour définir un résultat de test positif, et les tests IgA ont tendance à avoir une spécificité plus faible pour détecter une infection passée par rapport aux tests IgG uniquement ou aux tests d'anticorps totaux. La spécificité du test est particulièrement importante pour les grandes études de sérosurveillance lorsque la prévalence d'infections antérieures dans la communauté devrait être faible. Pour être utiles, les tests d'anticorps anti-SRAS-CoV-2 doivent avoir une sensibilité et une spécificité cliniques élevées (c'est-à-dire > 99,5%).

En plus de l'utilisation dans les études épidémiologiques, le panel a identifié deux scénarios cliniques où les tests d'anticorps ont été estimés comme ayant une utilité potentielle pour le diagnostic. Les tests sérologiques peuvent être utiles dans l'évaluation de patients individuels présentant une forte suspicion clinique de COVID-19 lorsque les résultats des tests de diagnostic moléculaire sont négatifs à plusieurs reprises ou que ces tests n'ont pas été effectués. La sensibilité et la spécificité des IgG et des anticorps totaux sont optimales trois à quatre semaines après le début des symptômes. À l'heure actuelle, il existe peu de données sur la cinquième semaine après l'apparition des symptômes pour juger de la performance des tests sérologiques à des périodes ultérieures après l'infection. La détection des anticorps anti-SARS-CoV-2 est également utile pour l'évaluation d'un syndrome inflammatoire multisystémique suspecté chez les enfants. Pour les patients symptomatiques, l'interprétation optimale des résultats sérologiques nécessite une détermination minutieuse du moment du test par rapport à l'apparition des symptômes, combinée à des évaluations de la gravité de la maladie. Sur la base des preuves disponibles à l'heure actuelle, les tests sérologiques ne devraient pas être utilisés pour déterminer l'immunité ou le risque de réinfection. Ainsi, la détection des anticorps anti-SRAS-CoV-2 ne peut pas éclairer les décisions d'interrompre la distanciation physique ou de réduire l'utilisation d'équipements de protection individuelle.

Vous trouverez ci-dessous des recommandations et des commentaires spécifiques liés à l'utilisation des tests sérologiques SARS-CoV-2 dans la pratique clinique et la santé publique. Une description détaillée du contexte, des méthodes, du résumé des preuves et des justifications à l'appui de chaque recommandation est disponible en ligne dans le texte intégral.

Recommandations

  • Recommandation 1 :Le panel IDSA suggère de ne pas utiliser de tests sérologiques pour diagnostiquer l'infection par le SRAS-CoV-2 au cours des deux premières semaines (14 jours) suivant l'apparition des symptômes (recommandation conditionnelle, très faible certitude des preuves).
  • Recommandation 2 :Lorsque l'infection par le SRAS-CoV-2 nécessite une confirmation en laboratoire à des fins cliniques ou épidémiologiques, tle panneau IDSAsuggère trecherche d'IgG SARS-CoV-2 ou d'anticorps totaux trois à quatre semaines après l'apparition des symptômes pour détecter les preuves d'une infection passée par le SARS-CoV-2 (recommandation conditionnelle, très faible certitude des preuves).
    • Remarque &ndash Lorsque la sérologie est considérée comme un complément au TAAN pour le diagnostic, le test trois à quatre semaines après l'apparition des symptômes maximise la sensibilité et la spécificité pour détecter une infection passée.
    • Remarque &ndash Les études de sérosurveillance doivent utiliser des tests à haute spécificité (c'est-à-dire > 99,5%), en particulier lorsque la prévalence du SRAS-CoV-2 dans la communauté devrait être faible.
    • Remarque &ndash Les tests combinés IgM ou IgG sont ceux où la détection de l'une ou l'autre classe d'anticorps est utilisée pour définir un résultat positif.
    • Remarque &ndash Lorsque la sérologie est considérée comme un complément au TAAN pour le diagnostic, le test trois à quatre semaines après l'apparition des symptômes maximise la sensibilité et la spécificité pour détecter une infection passée.

    Fond

    Depuis son émergence en décembre 2019, le coronavirus 2 du syndrome respiratoire aigu sévère (SARS-CoV-2) a causé plus de 21 millions d'infections connues et près de 770 000 décès dans le monde [1]. Le diagnostic définitif de la maladie à coronavirus 19 (COVID-19), la maladie causée par l'infection par le SRAS-CoV-2, repose sur la détection directe de l'ARN spécifique du virus ou des antigènes glycoprotéiques spécifiques du virus dans des échantillons des voies respiratoires. Les tests sérologiques qui détectent la réponse des anticorps de l'hôte au SRAS-CoV-2 peuvent également aider à confirmer la présence d'une infection actuelle ou passée à l'aide d'échantillons de sang.

    Les génomes des coronavirus codent pour quatre protéines structurelles majeures, notamment la pointe (S), l'enveloppe (E), la membrane (M) et la nucléocapside (N). Les protéines S et N du SRAS-CoV-2 se sont révélées immunogènes chez l'homme et les tests sérologiques actuels ciblent les anticorps dirigés contre ces antigènes [2]. La protéine S est la protéine virale la plus exposée et est responsable de l'attachement viral et de l'entrée dans la cellule hôte via la liaison au récepteur de l'enzyme de conversion de l'angiotensine 2 (ACE-2) [3]. La protéine S est composée d'une sous-unité S1 N-terminale, impliquée dans la liaison virus-récepteur, et d'une sous-unité S2 C-terminale qui est impliquée dans la fusion avec la membrane de la cellule hôte. La sous-unité S1 est en outre divisée en le domaine N terminal (NTD) et un domaine de liaison au récepteur (RBD). Un accent particulier a été mis sur le SRAS-CoV-2 RBD pour le développement de vaccins et les thérapies ciblées par anticorps, car les anticorps neutralisants contre cette région bloquent efficacement l'entrée virale [4, 5]. La protéine N est une protéine de liaison à l'ARN qui est abondamment exprimée au cours de l'infection et joue un rôle important dans la transcription et la réplication de l'ARN [6].

    Il existe deux types généraux d'anticorps, les anticorps neutralisants (nAbs) et non neutralisants (également appelés anticorps de liaison) [7]. La neutralisation est définie comme la perte d'infectiosité qui se produit lorsqu'un nAb se lie à une particule virale. Les nAb spécifiques au virus ou induits par le vaccin peuvent jouer un rôle crucial dans le contrôle de l'infection virale, mais il manque des données définitives pour savoir si les individus avec des nAb anti-SRAS-CoV-2 détectables sont protégés contre la réinfection. En comparaison, les anticorps de liaison sont caractérisés par leur incapacité à empêcher l'infection virale des cellules permissives. Indépendamment de leur fonction, les deux types d'anticorps spécifiques du virus sont potentiellement utiles en tant qu'indicateurs diagnostiques d'une infection actuelle ou passée.

    Les tests d'anticorps anti-SRAS-CoV-2 disponibles dans le commerce utilisent différentes technologies pour mesurer qualitativement les classes d'immunoglobulines individuelles (IgM, IgG ou IgA) ou les anticorps totaux, mais ne différencient pas les nAb des anticorps de liaison. Les anticorps IgM dirigés contre les micro-organismes sont généralement produits d'abord après l'infection et sont utilisés comme mesure d'une infection récente. Les anticorps IgG se développent généralement plus tard après l'IgM et restent élevés pendant des mois voire des années après l'infection. Bien que les anticorps IgM puissent être détectés dans les deux premières semaines de symptômes chez certains patients, l'infection par le SRAS-CoV-2 semble inhabituelle dans la mesure où les IgM et les IgG augmentent plus souvent ensemble, plus de deux semaines après le début des symptômes [8]. Les IgA sécrétoires sont importantes pour l'immunité muqueuse. L'IgA peut également être détectée de manière systémique dans certains types d'infection, notamment le SRAS-CoV-2, mais on sait relativement peu de choses sur la cinétique de l'IgA dans le sang. Les composants de "l'anticorps total" comprennent vraisemblablement des IgM et des IgG et théoriquement d'autres immunoglobulines spécifiques de l'antigène également.

    Étant donné que la majorité de la population a déjà été exposée à des coronavirus humains saisonniers (HCoV), et que ces virus peuvent partager une structure similaire avec le SRAS-CoV-2, une partie essentielle du développement et de la validation des tests sérologiques consiste à garantir que l'anti-SRAS -Les anticorps CoV-2 détectés par un test donné ne réagissent pas de manière croisée avec d'autres coronavirus (par exemple, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-OC43 ou HCoV-HKU1). Les études de spécificité impliquent généralement l'analyse des sérums archivés obtenus avant l'identification du COVID-19 en tant qu'entité clinique, ainsi que l'évaluation des substances interférentes potentielles telles que les auto-anticorps ou les anticorps hétérophiles.

    Les plates-formes de diagnostic clinique les plus couramment utilisées pour le SRAS-CoV-2 comprennent les dispositifs à flux latéral (LF), les dosages immuno-enzymatiques (ELISA) et les dosages immunologiques chimiluminescents (CIA). Les dosages à flux latéral nécessitent généralement une goutte de sang (ou de sérum ou de plasma) appliquée sur une bandelette réactive, les résultats étant lus en 15 à 30 minutes environ. Ces dispositifs sont adaptés aux tests au point de service et ont le potentiel d'être déployés sur le terrain dans le cadre de grandes enquêtes sérologiques. ELISA est disponible dans une variété de formats différents.Typiquement, un complexe antigène-anticorps lié est détecté à l'aide d'un anticorps secondaire spécifique de type lié à un substrat qui génère un signal colorimétrique ou fluorescent. Les méthodes CIA sont similaires à ELISA mais utilisent des sondes chimiques qui émettent de la lumière au lieu de substrats enzymatiques. ELISA et CIA sont des méthodes cliniques en laboratoire pouvant être modifiées en tests à haut débit utilisant du sérum, du plasma ou des gouttes de sang potentiellement séché. À l'heure actuelle, les tests de neutralisation sont principalement utilisés dans des contextes de recherche ou proposés comme tests développés en laboratoire par des laboratoires de référence.

    Aux États-Unis, la Food and Drug Administration (FDA) exige actuellement une autorisation d'utilisation d'urgence (EUA) pour commercialiser un test d'anticorps SARS-CoV-2. Cela signifie que les fabricants commerciaux et les laboratoires cliniques avec des tests développés en laboratoire doivent soumettre des données de performance à la FDA pour examen. Au début de la pandémie, cependant, l'examen officiel de l'EUA était volontaire. Les développeurs de tests devaient uniquement valider en interne leurs tests et informer la FDA de leur intention de commercialiser. En conséquence, le marché a été inondé de tests peu performants. En réponse, la FDA a par la suite publié une liste de tests &ldquoremoved&rdquo qui comprend des tests pour lesquels des problèmes de performances significatifs ont été identifiés, des tests pour lesquels l'examen officiel de l'EUA n'a pas été soumis de manière appropriée ou des tests volontairement retirés par le développeur.

    De nombreux tests sérologiques différents pour le SRAS-CoV-2 sont devenus disponibles dans le commerce en peu de temps. L'incroyable vitesse de développement a largement dépassé les évaluations rigoureuses des performances des tests. Par conséquent, l'IDSA a réuni un groupe d'experts pour examiner systématiquement la littérature sérologique disponible, comparer les estimations regroupées de l'exactitude des tests et faire des recommandations fondées sur des preuves pour une utilisation éclairée dans la pratique clinique.


    Conclusion

    Le développement et la mise en œuvre rapides d'une gamme de tests de diagnostic est sans aucun doute une partie essentielle de la réponse coordonnée à un nouveau pathogène. Cependant, les limites des nouveaux tests et de leur compréhension par les cliniciens doivent être prises en compte. 4,5 À notre connaissance, il s'agit de la première étude à enquêter sur la réponse interprétative des cliniciens à la nouvelle sérologie du SRAS-CoV-2. Il existe des limites importantes à la conception de notre étude, à la fois dans notre nombre modeste de réponses à l'enquête et la nécessité d'une conception et d'une mise en œuvre rapides en raison de la nature évolutive de la pandémie. Les commentaires en texte libre étant facultatifs, leur analyse est également limitée. Cependant, nous soulignons qu'il y aura probablement une variation marquée dans l'interprétation clinique des résultats sérologiques du SRAS-CoV-2 à mesure qu'ils seront disponibles. Des recherches supplémentaires dans ce domaine sont nécessaires de toute urgence, car cela peut avoir de graves implications pour les efforts de santé publique en cours pour maintenir les mesures de distanciation sociale et l'isolement des patients touchés par COVID-19. Un soutien interprétatif proactif, qui comprend des « commentaires narratifs » de la part de spécialistes de laboratoire et de spécialistes des maladies infectieuses, est fortement recommandé (Encadré 1).

    Exemples de commentaires interprétatifs pouvant être utiles pour déclarer la sérologie SARS-CoV-2


    Développement et validation d'un panel de tests sérologiques pour la détection de l'infection par le virus Powassan chez les patients américains résidant dans les régions où la maladie de Lyme est endémique

    Figure 1 Titrage d'échantillons de maladies transmises par les tiques (TBD) en phase aiguë dans un test d'immunofluorescence indirecte (IFA) pour déterminer les dilutions de dépistage optimales. (a) Dilutions en série de 2 fois de l'échantillon TBD en phase aiguë avec un titre de test de neutralisation par réduction de plaque (PRNT) du virus Powassan (POWV) de 1:320 pour déterminer la dilution de dépistage optimale pour IgM IFA. (b) Dilutions en série de 2 fois de l'échantillon TBD en phase aiguë avec un titre POWV PRNT de 1:160 pour déterminer la dilution de dépistage optimale pour les IgG IFA.
    Échantillon
    non.
    Résultat pour le dosage :
    EIE TBE-C
    IgM
    POWV IFA
    IgM
    EIE TBE-C
    IgG
    POWV IFA
    IgG
    POWV PRNT90
    titre
    1+ND b ND≥1:401:5,120
    2+ND+≥1:401:640
    3+ND+≥1:401:2,560
    4ND≥1:20+≥1:401:320
    5+≥1:20ND≥1:401:5,120
    6ND≥1:20+≥1:1001:10,240
    7+ND+≥1:1001:40,960
    8NDNDNDND1:20
    9+≥1:20ND≥1:401:20

    Spécificité analytique.

    Figure 2 Échantillons de plasma de receveurs du vaccin contre le virus de la fièvre jaune (YFV) dans un test d'immunofluorescence indirecte (IFA) du virus Powassan (POWV) pour déterminer les dilutions de dépistage optimales afin d'éliminer la réactivité croisée. (En haut) Échantillon positif pour les IgG YFV 7 ans après la vaccination dosé à des dilutions de 1:20 (gauche) et 1:40 (droite) dans IgG IFA. (En bas) Échantillon positif pour l'IgM YFV 4 semaines après la vaccination dosé à des dilutions 1:10 (gauche) et 1:20 (droite) dans POWV IgM IFA.

    Test sérologique

    Nos rédacteurs examineront ce que vous avez soumis et détermineront s'il faut réviser l'article.

    Test sérologique, aussi appelé test de sérologie ou test d'anticorps, l'une des nombreuses procédures de laboratoire effectuées sur un échantillon de sérum sanguin (le liquide clair qui se sépare du sang lorsqu'on le laisse coaguler) dans le but de détecter des anticorps ou des substances apparentées qui apparaissent spécifiquement en association avec certaines maladies. Il existe différents types de tests sérologiques, par exemple les tests de floculation, les tests de neutralisation, les tests d'inhibition de l'hémagglutinine, les tests immuno-enzymatiques (ELISA) et les tests immunologiques par chimiluminescence.

    Parmi les tests de floculation, les tests de fixation du complément sont les plus courants. Ceux-ci sont basés sur la précipitation, ou floculation, qui se produit lorsqu'un anticorps et des antigènes spécialement préparés (substances qui provoquent la production d'anticorps dans le corps) sont mélangés. Les tests de neutralisation dépendent de la capacité d'un anticorps à neutraliser les propriétés infectieuses des organismes infectieux. Les tests d'inhibition de l'hémagglutinine sont basés sur la capacité des virus à provoquer l'agglutinement des globules rouges de certaines espèces animales (congeler ou s'agglutiner), cette agglutination sera empêchée par l'anticorps. Les ELISA utilisent la détection de signaux fluorescents, lumineux (chimioluminescents) ou colorimétriques. Les signaux sont produits par des réactions enzymatiques qui se produisent lors de la détection et de la quantification d'un antigène ou d'un anticorps spécifique dans une solution. Les immunoessais par chimiluminescence sont basés sur la détection de signaux lumineux émis par des réactions chimiques entre des enzymes ou des sondes chimiques qui se lient aux anticorps.

    Les tests sérologiques sont particulièrement utiles dans le diagnostic de certaines maladies bactériennes, parasitaires et virales, notamment la fièvre pourprée des montagnes Rocheuses, la grippe, la rougeole, la polio, la fièvre jaune et la mononucléose infectieuse. Il est également utile dans la détection des auto-anticorps (anticorps nocifs qui attaquent les composants du corps) qui sont impliqués dans les maladies auto-immunes, telles que la polyarthrite rhumatoïde. En tant qu'outil pratique de dépistage de masse, les tests sérologiques se sont avérés précieux pour la détection de maladies telles que la syphilis, le VIH/sida et les maladies infectieuses épidémiques et pandémiques (par exemple, la grippe et les maladies à coronavirus). Voir également analyse de sang.

    Les rédacteurs de l'Encyclopaedia Britannica Cet article a été récemment révisé et mis à jour par Kara Rogers, rédactrice en chef.


    Fond

    L'infection par le coronavirus 2 du syndrome respiratoire aigu sévère (SRAS-CoV-2) déclenche une réponse immunitaire humorale qui produit des anticorps contre des antigènes viraux spécifiques tels que la protéine de nucléocapside (N) et la protéine de pointe (S), qui comprennent des anticorps spécifiques anti-protéine S qui ciblent la sous-unité de protéine spike&rsquos S1 et les domaines de liaison au récepteur (RBD). Les tests sérologiques peuvent détecter la présence de ces anticorps dans le sérum dans les jours à semaines suivant l'infection aiguë. Cependant, les tests sérologiques ne doivent pas être utilisés pour diagnostiquer une infection aiguë par le SRAS-CoV-2. Les tests sérologiques peuvent identifier les personnes atteintes d'une infection par le SRAS-CoV-2 en cours ou passée et ainsi aider les scientifiques et les experts en santé publique à mieux comprendre l'épidémiologie des individus et des populations à risque plus élevé d'infection par le SRAS-CoV-2. Bien que les corrélats immunitaires de la protection ne soient pas entièrement compris, les preuves indiquent que le développement d'anticorps après l'infection confère probablement un certain degré d'immunité contre l'infection subséquente pendant au moins 6 mois. Cependant, on ne sait pas dans quelle mesure les variantes virales émergentes peuvent avoir un impact sur l'immunité contre une infection ultérieure.


    Obstacles au succès

    Les problèmes d'exactitude et les questions concernant les directives d'autorisation ont généré des hésitations parmi les laboratoires cliniques effectuant des tests sérologiques. Une grande partie de cette incertitude est basée sur des données limitées. Ironiquement, les applications directes des tests sérologiques créent des obstacles inhérents à la réponse à ces questions. Lorsque les laboratoires prennent des décisions en temps réel sur l'allocation des ressources, du temps et de l'expertise, le fait que les tests sérologiques ne soient pas destinés à un usage diagnostique a un impact. Les laboratoires hospitaliers doivent donner la priorité à l'identification des cas aigus de maladie afin de contenir la propagation de la maladie et de fournir un traitement efficace aux patients gravement malades. En bref, les études de surveillance sont utiles à des fins épidémiologiques, mais pas la première priorité dans les situations de triage. C'est pourquoi les tests sérologiques sont principalement effectués dans les grands laboratoires cliniques et les installations de recherche en ce moment.

    Il est donc intéressant de conclure par un résumé des utilisations actuellement recommandées pour les tests sérologiques.

    Quand utiliser les tests sérologiques COVID-19

    • La principale application des tests sérologiques est l'identification des personnes qui ont déjà été infectées par le SRAS-CoV-2. Ces connaissances peuvent être utilisées pour orienter les études d'épidémiologie et de séroprévalence, ainsi que pour faciliter la recherche des contacts.
    • Les tests sérologiques peuvent également être utilisés pour identifier les donneurs potentiels de plasma convalescent et pour évaluer la réponse immunitaire aux vaccins candidats.
    • Enfin, il y a potentiel pour les tests sérologiques pour aider au diagnostic de COVID-19 chez les patients négatifs à la RT-PCR qui se présentent plus tard au cours de l'évolution de la maladie.

    Quand les tests sérologiques COVID-19 ne doivent pas être utilisés

    • Les tests sérologiques ne doivent pas être utilisés pour diagnostiquer des cas aigus ou récents de COVID-19.
    • À l'heure actuelle, les tests sérologiques ne peuvent pas être utilisés pour déterminer définitivement si un patient a développé une immunité protectrice.
    • En raison des limitations ci-dessus, les tests sérologiques SARS-CoV-2 ne doivent pas être utilisés pour guider l'utilisation des équipements de protection individuelle (EPI) ou le respect des pratiques de distanciation sociale.

    "En l'absence de thérapies approuvées et éprouvées, les diagnostics deviennent particulièrement importants", a déclaré le Dr Bertuzzi. &ldquo70% des décisions des médecins&rsquo sont basées sur des tests effectués en laboratoire.&rdquo Mais nous devons rester prudents.

    &ldquoNous devons être clairs sur l'utilité des tests, et nous devons faire preuve de prudence scientifique pour ne pas gaspiller inutilement les ressources que nous avons développées», a ajouté le Dr Gerberding. &ldquoNous&rsquo sommes loin de l'immunité collective, nous devons donc trouver d'autres solutions pour redémarrer notre économie.&rdquo L'American Society for Microbiology a développé des procédures étape par étape pour aider les laboratoires à développer des protocoles de vérification efficaces et efficients pour les tests sérologiques COVID-19.


    Lab 17 : Sérologie, Tests sérologiques directs et indirects - Biologie

    Nous avons examiné prospectivement l'efficacité des tests de diagnostic de l'anaplasmose chez des patients suspects de diagnostic en France. La PCR (sensibilité 0,74, spécificité 1) était le test le mieux adapté. La sérologie avait une spécificité plus faible mais une sensibilité plus élevée lors du test d'échantillons aigus et convalescents. La PCR et la sérologie doivent être utilisées en association pour le diagnostic de l'anaplasmose.

    L'anaplasmose granulocytaire humaine (HGA) est une infection bactérienne intracellulaire transmise par les tiques causée par Anaplasma phagocytophilum. La maladie est présente en Amérique du Nord, en Europe et en Asie du Nord, des régions à Ixodes ricinus les tiques, le principal vecteur de transmission à l'homme (1,2). Les manifestations cliniques de la maladie comprennent une fièvre aiguë, des maux de tête et des myalgies survenant 2 à 3 semaines après la morsure de tique. Le diagnostic nécessite l'isolement de A. phagocytophilum dans l'hémoculture, la présence de morulae dans les cellules polymorphonucléaires après coloration May Grünwald-Giemsa des frottis sanguins périphériques, des résultats sérologiques positifs (séroconversion ou titre élevé d'anticorps spécifiques), ou un A. phagocytophilum Résultat de la PCR. Le test de coloration de May Grünwald-Giemsa a une faible sensibilité (3) La PCR et la sérologie sont plus largement disponibles, mais leur valeur diagnostique n'est pas bien établie. Le but de notre étude était de comparer les valeurs diagnostiques des tests microbiologiques disponibles dans une série prospectivement sélectionnée de patients présentant des signes et symptômes cliniques compatibles avec un diagnostic d'HGA.

    L'étude

    Dans cette étude prospective multicentrique, nous avons recruté des patients symptomatiques vivant en Alsace, une région du nord-est de la France où les maladies transmises par les tiques sont fortement endémiques. Les patients ont donné leur consentement écrit et éclairé pour participer à notre étude, qui a été approuvé par le comité d'éthique du CHU de Strasbourg (Strasbourg, France).

    Nous avons inclus les patients s'ils présentaient l'une des combinaisons suivantes de signes et de symptômes survenant pas plus de 4 semaines après une morsure de tique : 1) fièvre ou autre symptôme présumé lié à une morsure de tique, 2) fièvre plus thrombocytopénie avec ou sans leucopénie ou taux d'enzymes hépatiques, 3) thrombocytopénie avec ou sans leucopénie, ou 4) taux d'enzymes hépatiques élevés sans fièvre. La première visite comprenait des évaluations cliniques et épidémiologiques et la collecte d'échantillons de sang pour A. phagocytophilum sérologie, coloration de May Grünwald-Giemsa et A. phagocytophilum–PCR spécifique. Nous n'avons pas cultivé pour A. phagocytophilum. Une enquête étiologique a également été menée pour obtenir un diagnostic différentiel. Après > 4 semaines, une deuxième visite a été programmée pour obtenir une évaluation clinique, A. phagocytophilum sérologie, et (si nécessaire) un diagnostic différentiel complet.

    Nous avons stratifié les patients en 3 groupes sur la base de leur diagnostic. Un groupe comprenait des témoins, qui étaient des patients avec un diagnostic de non-anaplasmose cliniquement et microbiologiquement confirmé. Le deuxième groupe comprenait des patients atteints d'anaplasmose définis par > 1 des critères suivants : morulae intraleucocytaire sur frottis sanguin, un résultat PCR positif pour Anaplasme, un titre d'anticorps multiplié par 4 pour A. phagocytophilum dans l'échantillon de suivi ou une séroconversion (c'est-à-dire un changement du titre d'anticorps de négatif dans le premier échantillon à > 1:64 dans le deuxième échantillon), ou un titre Anaplasme ( > 1:256) par dosage d'anticorps par immunofluorescence indirecte. Le troisième groupe était constitué de patients sans aucun diagnostic.

    Nous avons effectué une extraction d'ADN, une PCR et des tests sérologiques en aveugle pour l'identification de l'échantillon comme décrit précédemment (4). Le PCR ciblait le A. phagocytophilum msp2/p44 gène. Nous avons effectué des tests sérologiques en utilisant le Anaplasma phagocytophilum Dosage IFA IgG (Focus Diagnostics, http://www.focusdx.com) (4). Le personnel formé a examiné les préparations de frottis colorés par May Grünwald-Giemsa d'échantillons de sang total à la recherche de morulas intracellulaires. Nous avons collecté des données à l'aide d'EpiData version 3.1.2701.2008 (http://epidata.dk) et extrait les données dans des feuilles de calcul Excel (Microsoft, https://www.microsoft.com) pour analyse. Après stratification des patients, nous avons estimé la sensibilité et la spécificité des différents tests diagnostiques.

    Chiffre. Distribution des résultats positifs des tests de diagnostic chez les patients atteints d'anaplasmose granulocytaire humaine confirmée, France, mai 2010-juillet 2012.

    Entre mai 2010 et juillet 2012, nous avons inclus 155 patients dans l'étude, dont 25 n'ont pas terminé la deuxième visite. Aucun de ces 25 patients n'a eu de résultat PCR positif ou de titre d'anticorps > 1:256 lors de la première visite. Les 130 patients restants ont effectué les deux visites d'étude et ont donc été inclus dans l'évaluation de l'étude. Sur ces 130 patients, 19 avaient un diagnostic confirmé d'anaplasmose et 36 étaient des témoins avec un diagnostic confirmé de non-anaplasmose (infections avec Borrelia burgdorferi, virus d'Epstein-Barr, cytomégalovirus, VIH, virus de l'encéphalite à tiques, Leptospira spp., Babesia spp., parvovirus B19, hantavirus, Francisella tularensis, Plasmodium spp., et Aeromonas spp.). Parmi les patients atteints d'HGA, 84,2% (16/19) répondaient aux critères sérologiques et 73,7% (14/19) répondaient aux critères PCR (Tableau Figure). La fièvre, symptôme le plus fréquent (89 %), était associée à des douleurs articulaires et musculaires. Une cytopénie des plaquettes, des neutrophiles ou des deux (74 %) et des taux élevés d'enzymes hépatiques (63 %) étaient fréquemment présents.

    Les calculs de la valeur diagnostique de chaque méthode de test ont montré que la PCR avait une sensibilité de 0,74 et une spécificité de 1 et que la coloration des frottis sanguins avait une sensibilité de 0,21 et une spécificité de 1. La séroconversion ou une augmentation de 4 fois du titre d'anticorps avait une sensibilité de 0,32 et une spécificité de 0,97, un titre d'anticorps > 1:256 avait une sensibilité de 0,58 et une spécificité de 0,97, et la sérologie globale avait une sensibilité de 0,84 et une spécificité de 0,97.

    L'intervalle entre les premier et deuxième tests sérologiques pour la plupart des patients du groupe anaplasmose était de 4 à 8 semaines (moyenne 49,8 jours). Cinq patients ont eu le deuxième test >8 semaines après le premier. Parmi ces patients, 2 séroconvertis, 1 ont connu une diminution substantielle du titre d'anticorps, 1 a connu une augmentation substantielle à la semaine 12 et 1 avait un titre d'anticorps stable.

    Notre étude confirme que la PCR est le gold standard pour le diagnostic de l'HGA. Ce test a permis un diagnostic rapide au stade aigu de l'infection avec une bonne sensibilité et une excellente spécificité. Cependant, l'absence d'un test diagnostique de référence avec lequel comparer nos résultats constitue une limite à notre étude. A. phagocytophilum la culture est le test de référence pour le diagnostic de l'HGA (5,6) mais n'est pas bien adapté à une utilisation de routine car la culture prend du temps et n'est pas pratiquée à grande échelle. Le diagnostic de l'anaplasmose implique souvent d'évaluer la présence de morulae, mais ce test a une faible sensibilité (3). Dans notre étude, ce test était d'une valeur limitée pour le diagnostic de l'HGA car chaque fois que des morulae étaient détectés sur les frottis sanguins, > 1 des autres tests de diagnostic étaient positifs. Cependant, la coloration de May Grünwald-Giemsa est le test le plus rapide à faire, et lorsqu'elle est effectuée par du personnel qualifié, des résultats positifs sont utiles pour les médecins.

    En pratique clinique, le diagnostic de l'HGA repose souvent sur la sérologie (79), mais 2 limites sont associées à cette méthode : un risque de résultats faussement négatifs au stade aigu de l'infection car A. phagocytophilum les anticorps sont détectés en moyenne 11,5 jours après l'apparition des symptômes et un risque de résultats faussement positifs car Anaplasme les anticorps sont détectables chez 86,4 % des patients pendant 6 à 10 mois et chez 40 % des patients jusqu'à 2 ans après l'infection initiale (10). Les critères sérologiques positifs sont la séroconversion, une multiplication par 4 du titre d'anticorps ou un titre d'anticorps stable et élevé (11,12). Dans notre étude, nous avons observé que chacun de ces critères peut conduire à une erreur de diagnostic au début de l'infection, comme précédemment rapporté (13).

    La PCR est considérée comme la méthode de diagnostic la plus efficace au stade précoce A. phagocytophilum infection (14,15). Nos résultats confirment cette croyance, malgré notre limitation d'une petite population d'étude. Cependant, si la PCR est utilisée seule, l'HGA peut être sous-diagnostiquée.

    Conclusion

    La présentation de fièvre chez un patient ayant des antécédents de piqûre de tique ne justifie pas un diagnostic d'anaplasmose. Des tests microbiologiques doivent être effectués. Pour l'anaplasmose, le test PCR semble être l'outil de diagnostic le plus efficace. Cependant, la sensibilité de la PCR est <100%, et combiner la PCR avec des tests sérologiques lors de la première visite semble être la meilleure stratégie pour le diagnostic précoce de l'anaplasmose aiguë. En cas de forte suspicion d'HGA chez les patients sans aucun diagnostic lors de la première visite, un deuxième test sérologique > 4 semaines plus tard peut être utile. Une approche multiplex pourrait également être utilisée dans de tels cas pour rechercher des diagnostics différentiels.

    Le Dr Hansmann est chef du service des maladies infectieuses à l'hôpital universitaire de Strasbourg, Strasbourg, France, membre du groupe Borréliose de la Société européenne de microbiologie clinique et des maladies infectieuses et impliqué dans la conception du plan national de diagnostic et de santé des maladies transmises par les tiques pour la France. Ses intérêts de recherche sont les maladies transmises par les tiques et le diagnostic.

    Reconnaissance

    Cette étude a été soutenue par le Programme français de recherche clinique hospitalière (PHRC HUS 2007–3960).


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